2024-06-11

肝素钠分子呈与分子量分布

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照分子排阻色谱法(通则0514)测定。
供试品溶液:取本品适量,加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含5mg的溶液。
对照品溶液:取肝素分子量对照品适量,加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含5mg的溶液。
系统适用性溶液:取肝素分子量系统适用性对照品适量,加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含5mg的溶液。
色谱条件:以亲水改性键合硅胶为填充剂(TSK预柱,6mm×40mm,TSKgel G4000SWXL,7.8mm×300mm,TSKgel G3000SWXL,7.8mm×300mm,串联使用),以0.1mol/L醋酸铵溶液为流动相,流速为每分钟0.6mL,柱温为30℃,示差折光检测器,进样体积25μL。
系统适用性要求:系统适用性溶液色谱图中,主峰与溶剂峰能够彻底洗脱,重均分子量应在标示值±500范围内。
测定法:取对照品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。准确计算对照品溶液色谱图中肝素峰的总面积(不包括盐峰)及每个点的累积峰面积百分比,确定与肝素分子量对照品附带的宽分布标样表中累积峰面积百分比最接近点的保留时间及对应的分子量,以保留时间为横坐标,分子量的对数值为纵坐标,使用GPC软件,拟合三次方程,建立校正曲线,相关系数应不小于0.990。
另取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图,按下式计算本品的重均分子量。
式中,RIi为洗脱的i级分的物质量,即示差色谱图的峰高;
Mi为由校正曲线计算得出的i级分的分子量。
限度:重均分子量应为15000~19000,分子量大于24000的级分不得大于20%,分子量8000~16000的级分与分子量16000~24000的级分比应不小于1.0。

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